• 你的位置:首頁 > 技術文章 > 使用凍存管凍存和復蘇細胞怎么做

    技術文章

    使用凍存管凍存和復蘇細胞怎么做

    技術文章
      凍存管的使用是一門學問,并不是打開液氮罐、放入凍存管、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的??茖W正確地使用凍存管,可以避免樣本的損失,并保護試驗人員的安全。
      01細胞凍存流程
      1、用預熱過的 PBS 對細胞進行沖洗,棄去 PBS 后,加入含 EDTA 的胰酶消化液對細胞進行消化(消化液薄薄地覆蓋細胞表面即可,消化液濃度須根據不同的細胞系進行調整)。
      2、37℃消化細胞 3–5 分鐘,不可過度消化。
      3、一旦細胞從底部脫離,即可用含血清培養基終止消化,并用吸管輕輕吹打以重懸細胞。
      4、離心(500 × g, 5 min)細胞重懸液以沉淀細胞,棄上清,用含血清培養基對細胞沉淀進行重懸。
      5、對細胞進行計數(推薦 Neubauer chamber)。
      6、離心(500 × g, 5 min)細胞重懸液,棄上清。用適當體積含血清培養基重懸細胞。
      7、將細胞重懸液以 1:1 比例與凍存液(60% 培養基,20% FCS,20% DMSO) 進行混合后轉移至 Cryo.sTM 凍存管中。凍存管中細胞的濃度應為 1–5 ×10^6細胞/ml。
      8、含有細胞的凍存管須按照 −1 K/min 的冷卻速率進行冷凍。將凍存管插在含異丙醇的凍存盒小室并放置在−70℃的冰箱中可以實現上述要求。如果 凍存液中含有其他類型的樣品時,則需要將 Cryo.s 凍存管在−20℃,−70℃或者液氮的氣相層進行直接凍存。為確保每個樣品的均一凍存效 果,4 ml 和 5 ml 的 Cryo.s凍存管需在−20℃過夜凍存后再轉移至 70℃或者液氮的氣相層。
      9、然后將 Cryo.s 凍存管轉移至液氮罐。為避免污染(例如支原體)并考慮到安全預防規范的要求,建議將 Cryo.s 凍存管放置在液氮上方的氣相層而非液氮層。
      02細胞復蘇流程
      1、從液氮罐中取出凍存管后立即將其置于 37℃水浴中進行解凍,解凍時間約 1–2min,解凍時需要不停搖動凍存管令其盡快融化。此步解凍過程越快越好。
      2、將解凍好的細胞懸液轉移到 15 ml 離心管,并立即添加一定量含血清培養基進行混合。
      3、離心(500 × g, 5 min)細胞重懸液,棄去上清。用適當體積的含血清培養基對細胞沉淀進行重懸后分裝到 1 個或多個細胞培養瓶中。
      4、請遵循細胞接種時的推薦濃度進行培養。
      5、接下來的 12 個小時細胞需要靜置培養。
      6、細胞換液可在 24–48h 后進行。




    av片在线观看,日韩精品久久久久久久电影蜜臀,精品无码综合一区二区三区,亚洲视频一区在线播放,亚洲精品天堂在线观看